反相色譜柱的工作原理

　　反相色譜柱的介紹：
 

　　根據流動相和固定相相對極性不同，液相色譜分為正相色譜和反相色譜。流動相極性大于固定相極性的情況，稱為反相色譜。非極性鍵合相色譜可作反相色譜。在現代液相色譜中應用廣泛，現代液相色譜分析工作的70%以上是在非極性鍵合固定相上進行的。
 

　　反相色譜柱的原理：
 

　　反相色譜是指利用非極性的反相介質為固定相，極性有機溶劑的水溶液為流動相，根據溶質極性(疏水性)的差別進行溶質分離與純化的洗脫色譜法。溶質在反相介質上的分配系數取決于溶質的疏水性，一般疏水性越大，分配系數越大。當固定相一定時，可以通過調節流動相的組成調整溶質的分配系數。由于反相介質表面為強烈疏水性，并且流動相為低極性的有機溶劑，生物活性大分子在反相色譜分離過程中容易變性失活，以回收生物活性蛋白質為目的時，應注意選用適宜的反相介質。
 

　　反相色譜固定相大多是硅膠表面鍵合疏水基團，基于樣品中的不同組分和疏水基團之間疏水作用的不同而分離。在生物大分子分離中，多采用離子強度較低的酸性水溶液，添加一定量乙腈、異丙醇或甲醇等與水互溶的有機溶劑作為流動相。